棘皮微管相关蛋白样蛋白 4-间变性淋巴瘤激酶（echinoderm microtubule associated proteinlike 4- anaplastic lymphoma kinase，EML4-ALK） 突变体 1（variant 1，V1）融合突变基因组 RNA 标准物质可作为测量标准，用于 EML4-ALK V1 融合基因定性、定量测量方法的确认、验证以及实验室质量控制。

一、样品制备

本标准物质是通过提取纯化 EML4-ALK V1 型融合高表达细胞系的基因组 RNA，稀释至一定浓度分装制备而成。

二、溯源性及定值方法

采用绝对定量方法-数字 PCR 方法对 EML4-ALK V1 型融合基因以及 ALK-ref*基因拷贝数浓度测定，得到标准物质的标准值。通过使用满足计量学特性要求、经确认的绝对定量测量方法和经检定校准的容量计量器具，确保本标准物质的量值溯源至可作为任何一个量制基本单位的实体数基本单位“一”（符号：1）以及体积的国家法定计量单位升（L）。

三、特性量值及不确定度

编号	名称	突变基因浓度		ALK-ref 基因浓度*		突变基因丰度
		标准值（copies/μL）	相对不确定度（k=2）	标准值（copies/μL）	相对不确定度（k=2）	标准值	相对不确定度（k=2）
NIM-RM5241	EML4-ALK V1 融合突变 基因组 RNA 标准物质	3.68×103	12%	4.51×103	10%	81.40%	12%

*包括了 ALK 非融合基因与 EML4-ALK 融合基因拷贝数浓度所赋特性量值的不确定度由定值测量、均匀性以及稳定性引入的不确定度分量合成得到。

四、均匀性及稳定性评估

参照 JJF1343 国家计量技术规范（等效 ISO 指南 35），采用数字 PCR 方法对该标准物质进行均匀性检验，结果表明均匀性良好，最小取样量为 2 μL。采用数字 PCR 方法对该标准物质进行稳定性考察，自定值日期起，有效期为 2 年，研制单位将继续跟踪监测该标准物质的稳定性，有效期内如发现量值变化，将及时通知用户。

五、包装、贮存及使用

1.包装规格：本标准物质采用 0.5 mL 冻存管包装，每管 30 μL。

2.保存和运输条件：置于-80°C 冰箱中保存，采用干冰运输。

3.使用注意事项：实验操作时应在冰上进行解冻，混匀离心后使用，不建议反复冻融。