新型冠状病毒 B.1.1.7 变异株体外转录 RNA 标准物质可作为测量标准，用于新型冠状病毒B.1.1.7 变异株核酸定性和定量测量方法的验证评价以及实验室质量控制。

一、样品制备

本标准物质是通过体外转录获得了新型冠状病毒 B.1.1.7 变异株重要特征基因核壳蛋白 N 基因（全长）、包膜蛋白 E 基因（全长）、刺突蛋白 S 基因（全长）和开放阅读框 1ab（ORF1ab）基因片段（基因组坐标：13162-15561，GenBank No. MC235412.1）的 RNA 转录子，按照比例混合后稀释至一定浓度分装。

二、溯源性及定值方法

采用绝对定量方法-数字 PCR 方法对 N、E、S 和 ORF1ab 基因进行拷贝数浓度测定，得到标准物质的标准值。通过使用满足计量学特性要求、经确认的绝对定量测量方法和经检定校准的容量计量器具，确保本标准物质的量值溯源至可作为任何一个量制基本单位的实体数基本单位“一”（符号：1）以及体积的国家法定计量单位升（L）。

三、特性量值及不确定度

名称	编号	基因名称	标准值 (×103copies/μL)	扩展不确定度（k=2） (×103copies/μL)
新型冠状病毒B.1.1.7 变异株体外转录 RNA标准物质	NIM-RM5237	ORF1ab	2.21	0.30
		E	3.14	0.44
		N	2.36	0.36
		S	1.96	0.29

标准值不确定度评定考虑了定值方法、均匀性、稳定性引入的不确定度分量。

四、均匀性和稳定性评估

参照 JJF1343 国家计量技术规范（等效 ISO 指南 35），采用数字 PCR 方法对该标准物质进行均匀性检验，结果表明均匀性良好，最小取样量为 5 μL。采用数字 PCR 方法对该标准物质进行了初步稳定性考察，参考同类标准物质的稳定性数据，自定值日期起，有效期暂定为 12 个月，研制单位将继续跟踪监测该标准物质的稳定性，有效期内如发现量值变化，将及时通知用户。

五、包装、储存及使用

1.包装规格：本标准物质采用 0.5 mL 带内盖彩色冻存管包装，每管 50 μL。

2.保存及运输条件：置于-70℃冰箱中保存。采用干冰运输，收到标准物质后应检查标准物质是否处于冰冻状态。检查无误才可用于实验。

3.本标准物质开瓶后一次性使用，不可反复冻融。使用前应先从冰箱内取出，平衡至室温并混匀。

4.使用本标准物质进行 ORF1ab 基因测量时，请仔细核实拟使用的 PCR 引物序列在新型冠状病毒基因组的坐标。引物序列不能超出“样品制备”部分描述的基因组坐标范围。