ID | 产品编号 | 名称 | 英文名 | CAS编号 | 产地 | 规格 | 询问 |
---|---|---|---|---|---|---|---|
528262 | NIM-RM4061-1 | 数字PCR仪校准用拷贝数浓度标准物质(双色(FAM和VIC)引物探针) | 中国 | 50μL/管,(1.07±0.08)×10^4 copies/μL(于-80℃保存,干冰运输) | 咨 询 |
数字 PCR 仪校准用拷贝数浓度标准物质作为测量标准用于数字 PCR 仪的拷贝数浓度相对示值误差和拷贝数浓度重复性的校准。
一、样品制备
本标准物质是通过合成含有目的基因片段的质粒,经过酶切纯化,稀释至一定浓度后进行分装。
一个包装单元含有 50μL 的线性化质粒 DNA。
二、溯源性及定值方法
采用高效液相色谱外标法结合重量法和经确认的绝对定量方法-数字 PCR 方法对标准物质的拷贝数浓度进行测定,取两种方法的平均值作为标准物质的标准值。通过使用满足计量学特性要求、经确认的绝对定量测量方法和经检定/校准的容量计量器具,确保本标准物质的量值溯源至可作为任何一个量制基本单位的实体数基本单位“一”(符号:1)以及体积的国家法定计量单位升(L)。
三、特性量值及不确定度
编号 名称 标准值(copies/μL) 不确定度(k=2)(copies/μL) NIM-RM4061-1 数字 PCR 仪校准用拷贝数浓度标准物质 1.07×104 0.08×104 所赋特性量值的不确定度由定值测量、均匀性和稳定性引入的不确定度分量合成得到。
四、均匀性及稳定性评估
参照 JJF1343 国家计量技术规范(等效 ISO 指南 35),采用数字 PCR 方法对该标准物质进行均匀性检验,结果表明均匀性良好,最小取样量为 2μL。按照先密后疏的原则采用数字 PCR 方法对该标准物质进行长期稳定性考察,标准值无方向性变化并通过平均值一致性检验,表明稳定性良好,并通过运输稳定性研究确定了标准物质的运输条件。本标准物质自定值日期起,有效期为 4 年,研制单位将继续跟踪监测该标准物质的稳定性,有效期内如发现量值变化,将及时通知用户。
五、包装、贮存及使用
1.包装规格:本标准物质包括一管标准物质和一管 20×引物探针,标准物质采用 0.5 mL 冻存管包装,每管 50 μL,20×引物探针每管 20 μL。
2.保存和运输条件:置于-20℃冰箱中保存,采用冰袋运输。
3.使用注意事项:使用前应先从冰箱内取出,平衡至室温后离心再打开瓶盖使用。20 μL 的反应体系加入 1 μL 的 20×引物探针,模板 2 μL,可等比例扩大体系。扩增条件可按所用的 PCR 预混液进行,退火温度为 60℃。若使用的仪器为伯乐 QX200/QX100 可按如下进行扩增:95℃,10min;94℃,30s,60℃,1min,40 个循环;98℃,10min,其他平台可参考该扩增程序。
4. 配置引物探针信息如下:
双色引物探针:20×引物探针包括 2 种荧光标记(FAM 和 VIC),可以同时进行双重 PCR 反应,实现对两个荧光通道的拷贝数浓度重复性的校准。
三色引物探针:20×引物探针包括 3 种荧光标记(FAM、VIC 和 CY5),可以同时进行三重 PCR 反应,实现对三个荧光通道的拷贝数浓度重复性的校准。
四色引物探针:20×引物探针包括 4 种荧光标记(FAM、VIC、ROX 和 CY5),可以同时进行 4 重 PCR 反应,实现对四个荧光通道的荧光强度重复性的校准。